制备生物培养基的技能

指人工配制适合于微生物生长繁殖所需要的营养基质的技能。培养基用于微生物的分离、培养、鉴定、保藏等。制备生物培养基是微生物实验的基础，是生物教师应该掌握的基本技能之一。培养基成分根据微生物营养需要而不同，一般都含有碳水化合物、含氮物质、矿质元素和水等，按所用原料不同可分为天然培养基和合成培养基两类。用肉汤、马铃薯汁等天然成分配成的称天然培养基。用化学药品配成并标明成分的称合成培养基。根据培养基中是否加入凝固剂，可分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基等。制备固体培养基要在液体培养基中加入1.5—2%的琼脂，制备半固体培养基则加入0.2—0.5%的琼脂。
运用制备生物培养基的基本步骤和要求是：第一步称量。要根据培养基的配方，准确称量各种成分的原料，并放入烧怀中。第二步加热溶解。加凝固剂(琼脂)的培养基，要加热至琼脂溶化，并不时搅拌，以防糊底。第三步调pH值。用pH试纸或酸度计测试后，用10%氢氧化钠或10%盐酸调pH值至所需范围。第四步过滤分装。要用滤纸或多层纱布趁热过滤，并根据需要分装在试管中或三角瓶中，塞上棉塞。液体培养基分装高度以试管高度的1/4为宜；固体培养基分装试管为管高的1/5,灭菌后制成斜面；分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜；半固体分装试管以试管高度1/3为宜，灭菌后，垂直待凝固成半固体深层琼脂。第五步灭菌。要将分装好的培养基按照不同类培养基的规定，进行灭菌，灭菌后放在37℃室温中培养24小时，无菌生长方可使用。运用制备生物培养基的技能必须注意：①制备培养基前要准备好合乎要求的清洁的玻璃器皿和制备培养基的原料。②要了解不同种类微生物培养基的配方和灭菌要求。如肉汤蛋白胨培养基(细菌培养基)、牛肉膏3克、蛋白胨10克、食盐5克、琼脂15—20克、水1000毫升、pH7.0—7.2高压灭菌20钟；高氏一号培养基(放线菌培养基),可溶性淀粉20克、硝酸钾1克、食盐0.5克、磷酸一氢钾0.5克、硫酸镁0.5克、硫酸铁0.01克、琼脂15—20克、水1000毫升，pH7.2—7.4,高压灭菌20分钟；黄豆芽汁萄萄糖液培养基(真菌培养基):黄豆芽100克(煮成豆芽汁)、葡萄糖50克、琼脂15—20克、水1000毫升，高压灭菌20分钟，pH自然。③欲制斜面培养基，要将灭菌后的琼脂培养基趁热置于玻璃棒或小木条上，使培养基为试管长度一半，呈适当斜面，勿使斜面沾浸棉塞。如图3—9—2所示。

图3—9—2