冰冻切片法

指以水为包埋剂，利用致冷剂或冷冻装置，将经过固定或新鲜的组织块进行冰冻后在切片机上切成薄片制成玻片标本的方法。此法不需要脱水、透明或浸蜡，能在10—15分钟内完成从取材到制成切片的一切步骤，并能保存组织内某些易被有机溶剂溶解的物质，防止组织的收缩和变形。适合于脂肪、神经组织和其它组织化学的制片。
运用冰冻切片法制片的步骤和要求是：第一步取材与固定。新鲜的组织块可不经过固定处理直接进行冰冻后切片。为了切出薄片，一般多采用10%福尔马林液固定。第二步切片。首先要安装好切片机，将标本台用水湿润到适宜程度后，将组织块放在上面，并使组织块冻结，同时调好切片的厚度和转动标本台的升降把手，使冰冻的组织块上端与切片刀口相接为止。当组织块表面呈轻微的溶化时即可开始切片，切下的切片附着在刀片上，可用湿润的毛笔将它扫在盛水的培养皿中，切片要平推在水面或沉于水底。第三步贴片。要选择较好的切片贴在载玻片上。蛋白甘油贴片法是先在载玻片上涂一层蛋白甘油(将蛋清调打成雪花状泡沫，用双层纱布过滤出透明的蛋白液，加等量甘油配成),然后将载玻片插入水中，把切片托起，用解剖针拨正位置。明胶贴片法是将切片浸入1%明胶溶液中几分钟，用载玻片托起，拨正位置，再浸入福尔马林液中数分钟，使明胶固定后用蒸馏水洗去福尔马林。第四步染色与封藏。根据制片需要选择适合于制片目的染色液和封藏剂，封藏保存。
使用冰冻切片法制片必须注意：①经固定过的组织块要水洗后才能进行冰冻切片。②容易破碎的组织块，在切片前要用明胶包埋。③冰冻切片可以不贴片进行游离染色，也可以贴片后再染色。④用明胶包埋的切片，遇90%以上的酒精时会引起收缩，在染色和封藏时最好用水溶性的染料和封藏剂。