菌种保藏的技能

指保持微生物(实际指菌株)的生活力和原有性状的技能。优良的菌种如果保藏不好，会引起衰退和死亡，或者污染杂菌，给教学、生产、科研带来严重损失。菌种保藏技能是微生物实验的基础内容，是生物教师应掌握的技能之一。菌种保藏方法有斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、砂土保藏和冷冻保藏法等。
运用菌种保藏技能的操作方法和要求是：①斜面低温保藏。将菌种接种在营养丰富的固体培养基上。培养基成分要求：20%马铃薯煮出液1000毫升、葡萄糖30克、KH₂pO₄3克、维生素B₁10毫克、MgSO₄1.5克、琼脂20克。分装试管，灭菌后稍冷放成斜面，在无菌条件下接入所要保藏的菌种。待菌充分生长后，将试管的棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃冰箱中保藏。保藏时间依生物的种类而不同。霉菌、放线菌及芽孢菌保存2—4个月，移种一次。酵母菌两个月移种一次，细菌最好每个月移种一次。使用斜面低温保藏必须注意：此法容易使菌株变异，因为培养基的理化特性不是严格恒定的，会使微生物的代谢改变，从而影响微生物的性状，若菌种是经常使用，而且条件不变，可以采用此法。②液体石蜡保藏。又称矿油保藏。是在要保藏的斜面试管菌种培养物上盖上一层灭过菌的液体石蜡，以杜绝空气。液体石蜡要高出斜面的一厘米左右，注入石蜡后的试管放在试管架上在4—15℃的温度下保藏即可。若储于冰箱，可使菌种保持较长的存活时间。运用此法必须注意，要选择干燥场所保藏，保藏期间要定期检查，培养基露出液面时，要及时补充灭菌的液体石蜡。③砂土保藏。在灭过菌的砂土中接种细菌的芽孢、放线菌或真菌的孢子悬液，经真空干燥后，放在室温或冰箱中较长时间保存。运用此法必须注意：砂土要选择不含草根、杂物等有损保藏质量的物质，砂土的pH适宜中性，经60—80目筛子筛过，砂与土的比例在2:1—4:1之间。灭菌后要经无菌检验合格才可使用。④真空冷冻干燥保藏。是把所要保藏的微生物细胞悬浮在盛有脱脂牛乳等液体的安瓿瓶中，冷却结冰后，在零下20℃左右低温下抽成真空，使之呈干燥状态，密封后在低温下长期保存。此法特点，是低温、干燥、真空，使微生物生命活动呈休眠状态，能较长时间保藏菌种。